摘要：目的 研究抗郁丸對(duì)慢性溫和不可預(yù)見性應(yīng)激（CUMS）抑郁癥大鼠行為學(xué)及血清中甲 狀腺**、細(xì)胞因子的影響，探討抗郁丸**抑郁癥的作用機(jī)理。 方法 采用慢性溫和 不可預(yù)見性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)方法構(gòu)建 CUMS 大鼠模型。 60 只雄性大鼠隨機(jī)分為正常組（10 只）和模型 組（50 只），模型組造模 3 周后，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、丙咪嗪組及抗郁丸低、中、高劑量組，每組 10 只，記錄大鼠體重及糖水消耗量變化，并進(jìn)行開場(chǎng)行為檢測(cè)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)及懸尾實(shí)驗(yàn)。 給藥 8 周后處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，測(cè)定大鼠血清中甲狀腺**及細(xì)胞因子含量。 結(jié)果 模型對(duì)照組大鼠體重增長(zhǎng)減慢， 糖水消耗量減少， 行為運(yùn)動(dòng)得分降低， 強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間 及 懸 尾 不 動(dòng) 時(shí) 間 延 長(zhǎng) （P＜0．05 ） ， 血 清 中 四 碘 甲 狀 腺 激 素 氨 酸 （T4） 、 促 甲 狀 腺 激 素 （TSH ） 含 量 降 低 （P＜0．05 ） ， 白 介 素 1β （IL－1β ） 、 腫 瘤 壞 死 因子（TNF－α）及 IL－6 含量升高（P＜0．05），與正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 抗郁丸及丙咪嗪可加快模型大鼠的體重增 長(zhǎng) ，增 加 糖 水 消 耗 量 ，增 加 行 為 學(xué) 得 分 ，縮 短 強(qiáng) 迫 游 泳 不 動(dòng) 時(shí) 間 及 懸 尾 不 動(dòng) 時(shí) 間 （P＜0．05），并 提 高 血 清 中 T4及TSH 含 量 （P＜0．05 ） ， 不 同 程 度 降 低 IL－1β 、TNF－α 及 IL－6 水 平 （P＜0．05 ） ， 與 模 型 對(duì) 照 組 相 比 差 異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 。結(jié)論 抗郁丸能改善 CUMS 大鼠抑郁癥狀，逆轉(zhuǎn)抑郁癥大 鼠 血 清 中 甲 狀 腺 激 素 及 細(xì) 胞 因 子 的 含 量 ，這 可 能 是 其 發(fā)揮抗抑郁作用的重要機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：慢性溫和不可預(yù)見性應(yīng)激；抑郁癥；甲狀腺**；細(xì)胞因子

抑郁癥是一種由于身體某些器官功能紊亂或長(zhǎng)期失落心境而引起的慢性應(yīng)激病理狀態(tài)，其發(fā)病率高、發(fā)病年齡廣泛，嚴(yán)重威脅人們的健康和生命，導(dǎo)致沉重的社會(huì)負(fù)擔(dān)。 資料顯示，全球抑郁癥發(fā)病率為 4．2％， 中國(guó)高達(dá) 6．9％， 并且以 11．3％的增長(zhǎng)率逐年增加。 據(jù)預(yù)測(cè)到 2020 年抑郁癥將上升為全球**大**負(fù)擔(dān)。 因此，對(duì)抑郁癥發(fā)病機(jī)制及**的探討成為世界關(guān)注的重點(diǎn)。 目前臨床常用**包括三環(huán)類、四環(huán)類、神經(jīng)遞質(zhì)類抑制劑、單胺氧化酶抑制劑等，但由于副作用大、療效不理想、依從性差制約了臨床應(yīng)用。 而抑郁癥是一種典型的生物、心理、社會(huì)等多因素作用導(dǎo)致的**，可引起人體多系統(tǒng)的病理反應(yīng)，因此多層次、多靶點(diǎn)的中醫(yī)

**具有一定的潛力和優(yōu)勢(shì)。 根據(jù)傳統(tǒng)的疏肝解郁名方，我們開發(fā)出的抗郁丸以抗抑郁為主，兼有健脾**、養(yǎng)血柔肝、清熱除煩、養(yǎng)心**之功效，本 實(shí) 驗(yàn) 通 過 慢 性 溫 和 不 可 預(yù) 見 性 應(yīng) 激 （chronicunpredictable mild stress，CUMS）結(jié)合孤養(yǎng)方式構(gòu)建大鼠抑郁癥模型，研究抗郁丸對(duì)抑郁癥的功效，并以三 碘 甲 狀 腺 氨 酸 （triiodothyronine，T3）、 四 碘 甲 狀 腺氨酸 （tetraiodothyronine，T4）、 促甲狀腺**（thyroid-stimulating hormone，TSH） 以 及白介素-1β （interleukin

1β，IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子 （tumor necrosis factorα，TNF-α）為觀測(cè)指標(biāo) ，初步探討其作用機(jī)理 。

1 材 料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及分組 選用 SPF 級(jí) 健康雄性SD 大 鼠 60 只 ，體 重 （200±10）g，由中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)為 SCXK（粵）2011－0029。 適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后，根據(jù)體重隨機(jī)分為正常組（n＝10）和模型組（n＝50），正常組 5 只 ／ 籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)中不受任何刺激，模型組單籠飼養(yǎng)，采用 CUMS 法，每天隨機(jī)進(jìn)行一種應(yīng)激：禁食（24 h）、禁水（24 h）、夾尾（1min）、 晝夜顛倒 、 潮濕墊料 （ 墊料 ： 水 ＝1∶1）、 鼠籠傾斜 （45°）、冰 水 游 泳 （4℃，5 min）、合 籠 （5 只 ／ 籠 ，24h），前后兩天刺激不能相同 ，使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生種類，避免產(chǎn)生適應(yīng)現(xiàn)象。 造模 3 周后，將模型組大鼠根據(jù)體重隨機(jī)分為模型對(duì)照組 （雙蒸水 5ml ／ kg）、丙咪嗪組 （15 mg ／ kg）、抗郁丸低劑量組 （144mg ／ kg）、 中劑量組 （288 mg ／ kg）、 高劑量組 （576 mg ／kg），每組 10 只，各組每日灌胃一次 ，從 第 4 周 開始 ，連續(xù)給藥 8 周，給藥同時(shí)繼續(xù)進(jìn)行刺激。

1．2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 抗郁丸 ， 由無限極 （ 中國(guó) ）有限公司研發(fā)中心提供的復(fù)合藥，0．6 g ／ 片，主要成分為當(dāng)歸、川芎、陳皮、香附、白芍。低、中、高劑量組大鼠的給藥劑量分別按照相當(dāng)于**使用量的 0．5倍、1 倍、2 倍計(jì)算，配置成相應(yīng)濃度的混懸液（144、288、576 mg ／ kg），4℃ 冰箱保存?zhèn)溆?。 丙咪嗪 （ 廣州市 天 騏 生 物 科 技 有 限 公 司 ），劑 量 15 mg ／ kg，蔗 糖（廣州輝旺實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 ），用大鼠日常飲用水

配置成 1％濃度溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。 T3ELISA 檢測(cè)試劑盒、T4ELISA

檢測(cè)試劑盒、TSH ELISA 檢測(cè)試劑盒、IL-1β ELISA 檢測(cè)試劑盒、TNF-α ELISA 檢測(cè)試劑盒、IL-6 ELISA 檢測(cè)試劑盒 （廣州市一科生物科技有限公司）。開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)敞箱（100 cm×100 cm×40 cm）、強(qiáng)迫游泳玻璃缸（35 cm×35 cm×50 cm）由上海欣軟信息科技有限公司定制；電子分析天平（Mettle Toledo，Swiss）， 低溫高速離心機(jī) （Eppendorf， Germany），Elx800 酶 聯(lián) 免 疫 檢 測(cè) 儀 （ELX800Bio-TecInstruments）。

1．3 各種行為學(xué)檢測(cè)

1．3．1 體重測(cè)量與糖水消耗量 測(cè)量 于同等條件下每周進(jìn)行 1 次體重及糖水消耗量測(cè)定。 適應(yīng)性飼養(yǎng)的 1 周對(duì)大鼠進(jìn)行 1％糖水偏好訓(xùn)練， 每籠并排放置 2 個(gè)水瓶，兩瓶均為糖水放置 24 h，隨后一瓶糖水， 一瓶純水放置 24 h， 再經(jīng)過 24 h 禁食禁水后，進(jìn)行**次糖水消耗量基線測(cè)定，造模開始后的每周在固定時(shí)間測(cè)定一次，測(cè)定時(shí)均為單籠。 以1 h 糖水消耗量為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 。

1．3．2 開場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn) 于造模前 、 造模 3 周后 、 給藥 8 周后用開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱進(jìn)行行為學(xué)觀察。 開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱 100 cm×100 cm×40 cm，周壁 為 黑 色 ，底 面 用 白線劃分為面積相等的 25 個(gè)小方格。 將單只大鼠置于光潔開場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱中央，以動(dòng)物穿越地面方塊數(shù)為水平運(yùn)動(dòng)得分（四爪均進(jìn)入的方格才計(jì)數(shù)），以直立次數(shù)為垂直運(yùn)動(dòng)得分（兩前爪騰空或攀附周壁），以4 min 內(nèi)大鼠行為學(xué)得分為評(píng)價(jià)指標(biāo) 。

1．3．3 強(qiáng) 迫游泳實(shí)驗(yàn) 在大鼠造模前 、 造模 3 周后、給藥 8 周后在同等條件下進(jìn)行，共 3 次。 取一強(qiáng)迫游泳玻璃缸，加水深

30 cm 左右，水溫穩(wěn)定在室溫，將大鼠輕放水中適應(yīng) 2 min 后連續(xù)觀察 4 min，以 4 min 內(nèi)大鼠累計(jì)漂浮不動(dòng)時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1．3．4 懸 尾實(shí)驗(yàn) 在大鼠造模前 、 造模 3 周 后 、 給藥 8 周后在同等條件下進(jìn)行， 共 3 次。 將 SD 大鼠尾端 2 cm 處固定于水平面上，使其呈倒掛狀態(tài)，頭部離臺(tái)面約 30 cm，四周以板隔離動(dòng)物視線，適應(yīng) 2min 后 觀察 4 min 內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間 （不 動(dòng)指標(biāo)為大鼠除呼吸外所有肢體均不動(dòng)）。

1．4 血清中甲狀腺**及細(xì)胞因子含量測(cè)定 大鼠于連續(xù)給藥 8 周后，采用腹主動(dòng)脈取血 5 ml，4℃10 000 r ／ min 離 心 10min，

分 離 血 清 ， 置 于 －80° 冰箱保存待測(cè)， 采用 ELISA 方法檢測(cè)血清中 T3、T4、TSH 及 IL-1β 、TNF-α 、IL-6 的含量 。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分 析 采用 SPSS 17．0 軟 件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，兩組間比較采用 t 檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，兩兩分析采用 LSD檢驗(yàn)，P＜0．05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

     型號(hào)：XR-XQ202

3 討 論

20 世紀(jì) 60 年代開始 ， 人們針對(duì)抑郁癥發(fā)病機(jī)制的**神經(jīng)遞質(zhì)假說，試圖通過**誘發(fā)神經(jīng)遞質(zhì)功能紊亂來建立相應(yīng)的動(dòng)物模型

，主要包括有 5-羥色胺酸（5-HTP）誘導(dǎo)甩頭行為、利血平拮抗模型、高劑量阿撲**拮抗 模 型 等 ，但 藥 物 誘 導(dǎo)的抑郁模型與人類抑郁癥的發(fā)病機(jī)制相差甚遠(yuǎn)，且抑郁癥狀較單一。 情志異常是抑郁癥的主要病因，情志病因的實(shí)質(zhì)是**生活事件形成的心理應(yīng)激，因此用慢性心理應(yīng)激的方法制作抑郁癥模型比較符合臨床實(shí) 際 ，本 實(shí) 驗(yàn) 參 考 Willner 等 提 出 的 慢性溫和不可預(yù)見性應(yīng)激程序并加以改進(jìn)，結(jié)合孤養(yǎng)方式構(gòu)建大鼠 CUMS 抑郁癥模型，這與人類抑郁癥中慢性、低水平的應(yīng)激源導(dǎo)致抑郁癥發(fā)**展的機(jī)制更接近，糖水消耗是衡量動(dòng)物對(duì)獎(jiǎng)賞的敏感缺乏和快感消失的客觀有效指標(biāo)，抑郁癥臨床表現(xiàn)雖復(fù)雜多樣，但其核心癥狀的實(shí)質(zhì)是快感缺乏，糖水消耗量的減少，不僅較好地模擬人類抑郁癥的核心癥狀，而且操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，較敏感。 研究結(jié)果顯示，造模 3

周后，模型組大鼠糖水消耗量減少，體重增長(zhǎng)緩慢，各種行為出現(xiàn)異常改變，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 因此認(rèn)為 CUMS 抑郁癥模型造模成功，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。 經(jīng)過抗郁丸連續(xù) 8 周的**，抑郁癥大鼠的糖水消耗量增加，體重增長(zhǎng)加快， 抑郁行為得以一定改善， 說明抗郁丸對(duì)CUMS 誘導(dǎo)的抑郁癥大鼠具有一定的抗抑郁功效 。甲狀腺功能和抑郁癥的關(guān)系一直受到人們的關(guān)注，但結(jié)論尚不明確。 Whybrow 等學(xué)者提出甲狀腺功能與抑郁癥有關(guān)，

該學(xué)說指出甲狀腺功能低下者，血中 T3、T4含量下降，可降低抑郁癥發(fā)生的閾值，更易發(fā)生抑郁。 陳丹等在探討甲狀腺功能亢進(jìn)與抑郁癥關(guān)系的臨床觀察中發(fā)現(xiàn)， 在甲亢初期，T3、T4水平較高時(shí)患者表現(xiàn)為高代謝癥， 抑郁癥的發(fā)病率極低，在甲亢的**過程中

，隨著病情的好轉(zhuǎn) ， 血 清 中 T3、T4水 平 下 降 ， 抑 郁 癥 的 發(fā) 病 率 由6．8％ 增 加至 51％ ， 進(jìn) 一步**后 ， 甲狀腺水平正?；蚱?，甚至出現(xiàn)甲狀腺減退時(shí)，抑郁癥的發(fā)病率超過 50％，表明甲狀腺**的動(dòng)態(tài)下降參與抑郁癥的形成及病程變化。 而趙博等實(shí)驗(yàn)表明抑郁癥大鼠血清 T4、TSH 呈 升高趨勢(shì) ； 陳寶忠等 研 究顯示抑郁大鼠 T4含量降低，T3、TSH 無 明顯差異 ；佟海英等研究中，抑郁癥大鼠 T3含量升高，TSH 含量降低； 本實(shí)驗(yàn)中模型對(duì)照組大鼠血清中 T4、TSH 含 量降低，抗郁丸可上調(diào)降低的 T4、TSH 水 平 。

甲狀腺**水平與抑郁癥之間不一致的研究結(jié)論，折射出兩者之間復(fù)雜的相關(guān)性， 而甲狀腺**水平高低不一，除了與甲狀腺**自身的分泌調(diào)節(jié)受多種因素影響相關(guān)外，還可能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬和性別、造模刺激方式和強(qiáng)度、造模時(shí)間、采血時(shí)間等因素有一定的關(guān)聯(lián)性。“抑郁癥的細(xì)胞因子假說 ” 為探討抑郁癥的機(jī)制和**抑郁癥提供了一個(gè)新的視角，越來越多證據(jù)表明細(xì)胞因子和抑郁癥的發(fā)生之間存在密切聯(lián)系。 多項(xiàng)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于非抑郁癥患者而言，抑郁癥患者外周血液中炎癥細(xì)胞因子呈高水平過表達(dá)狀態(tài)，經(jīng)**后抑郁癥狀緩解時(shí)細(xì)胞因子含量降低趨于正常水平。 Wang 等研究表明，注射細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的小鼠出現(xiàn)了體重下降、糖水消耗減少等抑郁樣行為，抗抑郁藥**后其癥狀明顯好轉(zhuǎn)。 Thierno 等對(duì)心肌梗死后的抑郁大鼠進(jìn)行**后，大鼠的抑郁病態(tài)明顯改善，同時(shí)血液中炎性細(xì)胞因子水平下降。 本實(shí)驗(yàn)經(jīng)檢測(cè)模型組抑郁大鼠血清中 IL-1β 、TNF-α 及 IL-6 含量升高，抗郁丸治 療 后 能 有 效 降 低 IL-1β、TNF-α 及 IL-6 的 過 表達(dá)，改善抑郁行為。 細(xì)胞因子在抑郁癥的發(fā)生中可能的機(jī)制為：通過神經(jīng)***功能介導(dǎo)、通過神經(jīng)遞質(zhì)代謝介導(dǎo)、通過神經(jīng)元細(xì)胞的功能介導(dǎo)。 過度激活的細(xì)胞因子進(jìn)入腦內(nèi)相應(yīng)區(qū)域，造成神經(jīng)***功能的紊亂、神經(jīng)遞質(zhì)代謝障礙等一系列異常改變，在抑郁癥的病理過程中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，抗郁丸能改善 CUMS 大鼠的抑郁癥狀，逆轉(zhuǎn)甲狀腺**和細(xì)胞因子的異常水平，提示其可能是通過調(diào)節(jié)下丘腦－垂體－甲狀腺軸分泌功能、調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)從而發(fā)揮抗抑郁功效。